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RIPA裂解液(強)100ml 現貨

RIPA裂解液(強)100ml 現貨

型    號:
所屬分類:分離試劑類
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RIPA裂解液(強)100ml 現貨
強中弱三種,價格都一樣,220元/瓶,有現貨!

RIPA裂解液(強)100ml 現貨產品概述:

RIPA裂解液(強)

yobet体育生產的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用於常規的Western、IP等。

    RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種,根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關於不同的RIPA裂解液以及yobet体育生產的其它裂解液的主要特點和差異,以及如何選擇裂解液可參考附錄。

    RIPA裂解液(強)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及2mM sodium pyrophosphate,25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4,0.5 ug/ml leupeptin等多種抑製劑。可以有效抑製蛋白降解。

    用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用yobet体育生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由於含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

包裝清單:

產品編號

產品名稱

包裝

P1002

RIPA裂解液(強)

100ml

 

PMSF(100mM)

1.5ml

保存條件: -20℃保存,一年有效。

注意事項:為取得*的使用效果,盡量避免過多的反複凍融。可以適當分裝後使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。關於裂解液的選擇,一方麵可以參考yobet体育生產的各種裂解液主要特點、差異,選擇合適的裂解液;另一方麵也需要通過一些預實驗來摸索*的適合您實驗條件的裂解液。

使用說明:
對於培養細胞樣品:
1. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鍾內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
2. 對於貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有幹擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒後,細胞就會被裂解。
   對於懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解後應沒有明顯的細胞沉澱。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然後再裂解。
3. 充分裂解後,10000-14000g離心3-5分鍾,取上清,即可進行後續的PAGE、Western和免疫沉澱等操作。
   裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對於組織樣品:
1. 把組織剪切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鍾內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解後,10000-14000g離心3-5分鍾,取上清,即可進行後續的PAGE、Western和免疫沉澱等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切後直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然後同樣離心取上清,用於後續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注:RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組
DNA等的複合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用於後續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨後離心取上清用於後續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NFκB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。

 

附:yobet体育生產的各種裂解液主要特點、差異和選擇
首先請參考下表,了解各種裂解液的主要特點和差異。

產品編號

P1001

P1002

P1004

P1006

P1010

P1012

產品名稱

Western及IP細胞裂解液

RIPA裂解液()

RIPA裂解液()

RIPA裂解液(弱)

NP-40裂解液

SDS裂解液

有效裂解成分

1% Triton X-100

1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS

1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS

1% NP-40,0.25% deoxycholate

1% NP-40

1% SDS

裂解強度

溫和

溫和

溫和

對膜蛋白的提取

一般

很好

較好

一般

一般

很好

對胞漿蛋白的提取

很好

很好

很好

很好

很好

很好

對核蛋白的提取

較好

很好

較好

較好

較好

很好

胞漿磷酸化蛋白提取

很好

很好

很好

很好

很好

很好

細胞核轉錄因子提取

很好

很好

很好

很好

很好

很好

含蛋白酶抑製劑

含磷酸酯酶抑製劑

主要用途

WB, IP,co-IP

WB, IP

WB, IP

WB, IP, co-IP

WB, IP,co-IP

WB, ChIP

    用於普通的Western、IP或co-IP,yobet体育推薦使用Western及IP細胞裂解液(P0013),該裂解液已被國內各大研究機構廣泛使用,用戶普遍反映很好。裂解細胞或組織後,沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成,不必采用超聲處理等就可以非常理想地用於後續操作。 另外該裂解液裂解的產物也適合用於磷酸化蛋白的Western檢測。 
    對於某些特殊蛋白的IP,如果發現Western及IP細胞裂解液(P0013)效果不是非常理想,可以嚐試用RIPA裂解液(強、中或弱)或NP-40裂解液。如果發現IP的時候背景很高,即非特異的蛋白也被IP下來,則需要選用裂解強度較高的裂解液,例如RIPA裂解液(強或中)。如果發現目的蛋白無法被IP下來,則說明裂解液的強度過強,可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
    對於某些難溶解蛋白的Western,如果發現Western及IP細胞裂解液(P0013)效果不是非常理想,可以嚐試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強、中)或SDS裂解液。

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